TRANSGENIC FACILITY

La Transgenic Facility Plaisant offre servizi relativi alla generazione e conservazione di linee di topo geneticamente modificate. Il nostro personale qualificato fornirà il supporto necessario alla valutazione della metodica migliore per l’ottenimento della mutazione che si vuole introdurre.

Pronuclear Injection

La microiniezione di DNA esogeno all’interno del pronucleo dell’embrione allo stadio di zigote, permette la generazione di topi transgenici, tramite integrazione random del DNA di interesse nel genoma dell’ospite. Gli embrioni iniettati vengono poi trasferiti in una femmina ricevente. I topi neonati vengono quindi analizzati per la presenza del transgene tramite PCR.

Gene-Targeting in ES-cells

Cellule Staminali Embrionali (ES-Cells) di topo sono elettroporate con un vettore DNA target per introdurre mutazioni specifiche tramite ricombinazione omologa nel locus genetico di interesse. I cloni cellulari correttamente modificati verranno congelati ed espansi per poi essere microiniettati nell’embrione allo stadio di blastocisti. I topi risultanti dalla microiniezione saranno delle chimere, in quanto generate da due differenti tipi cellulari: le cellule dell’embrione e le ES iniettate. I topi chimerici vengono poi accoppiati con topi Wild-type (WT) per permettere la trasmissione della mutazione alla progenie nella linea germinale.

Ri-derivazione di Linee Murine

La riderivazione di linee murine in ambiente SPF (Specific Pathogen Free), è una procedura importante per l’eradicazione di patogeni all’interno di uno stabulario. I patogeni anche se non causano malattie cliniche possono modificare lo stato fisiologico dell’animale ed interferire con l’analisi sperimentale. Linee murine con patogeni possono essere ri-derivate in uno stato privo di patogeni mediante il trasferimento di embrioni da un topo contaminato ad una madre ricevente in area priva di patogeni. I topi risultanti da questa procedura saranno privi di patogeni. Si possono effettuare riderivazioni di topi sia in eterozigosi che in omozigosi.

Criopreservazione

La crioconservazione delle linee di topo è una procedura molto utilizzata per evitare la perdita di linee mutanti uniche e per una riduzione dei costi di mantenimento di una colonia non più in uso, in accordo con il principio delle 3R, evitando quindi la produzione di animali non necessari. La nostra Facility utilizza il congelamento degli spermi (Sperm Freezing) come metodo di base, data la sua rapidità e la necessità di un ridotto numero di animali originari per la procedura. Offre contestualmente anche un servizio di congelamento di Embrioni (Embryo Freezing) su richiesta.

SERVIZI OFFERTI

 Progettazione PCR per screening di topi mutanti  Genotipizzazione tramite PCR  CRISPR/Cas9 on going

 Riderivazione di Cellule Staminali Embrionali  Produzione di Fibroblasti di topo (Espansione e Congelamento)

 Cariotipo di Cellule Staminali Embrionali (geneticamente modificate)  Elettroporazione di ES cells per produzione di Topi Knock In e Knock Out

 Iniezione di Cellule Staminali Embrionali in Blastocisti/generazione di topi chimerici  Iniezione in zigote (Pronuclear Micro-injection) di DNA e RNA

 Crioconservazione: Sperm Freezing  Crioconservazione: Embryo Freezing